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細胞又污染了?這里有一份祖傳的鑒污寶典 遠慕新聞√

提供者:上海遠慕生物科技有限公司   發布時間:2019/11/22  閱讀次數:67次   進入該公司展臺

對于養細胞的人來說,可謂是談 「污」色變,任何時候聽見細胞污染晴空萬里立馬暴風雨,而細胞污染又是養細胞過程中,尤其是新手經常遇到的問題。

 

細胞污染是一個很廣的范圍,微生物的種類更是各種各樣,不同的污染的原因不同處理也不同,因此掌握對常見細胞污染的識別至關重要。

 

自己也是從剛開始養細胞 3 天一個小污染 7 天一個大污染過來,也積累了些經驗,自己整理歸納了一下,希望對養細胞的同學有所幫助。

 

講細胞污染之前需要說明一點,就是對待細胞大家一定要給予極大的重視,因為細胞相關的實驗細胞的狀態是很重要的。

 

對于確定污染的細胞最好的辦法就是及時丟棄,積極排查細胞污染的原因,除非是特別重要的細胞才會去搶救,而且搶救污染的細胞本來就有一定的風險,搞不好還可能會污染別的細胞。

 

下面進入正題,一般細胞污染大概分為細菌污染、真菌污染、支原體污染還有說法不一的黑膠蟲污染等。每種污染的特征都很明顯,因為微生物種類實在太多,所以我就選取比較典型和常見的污染講下。

 

識別細胞污染的第一步就是從培養箱拿出細胞后觀察細胞培養液的顏色,以常用的 DMEM 基礎培養液為例,一般使用 DMEM 配制的培養液的顏色為鮮紅色,而且是澄清透亮的,注意透亮不代表沒有顏色。

 

但是大多數情況下會看到以下幾種顏色,1 號管顏色偏紫一般原因是培養基 ph 升高置 ph 升高因有兩個一個是培養液在冰箱放置太久,培養液中的二氧化碳逸出,第二個是培養箱沒二氧化碳了,而且整個培養箱的細胞都會出現一樣的顏色。

 

 

2 號管顏色有點偏紅,一般是細胞生長消耗營養物質導致液 ph 稍微降低。

 

3 號和 4 號管顏色發黃,導致培養液顏色發黃的原因是培養液中的營養被大量消耗,培養液 ph 降低導致,導致 ph 降低的原因一般是細胞生長太快太滿,提醒自己需要給細胞換液或者傳代,但是有時細胞密度低生長速度緩慢也會出現這種情況,這時候就要懷疑是不是細胞污染了,除了細胞以外有其他東西在消耗著培養液的營養。

 

5 號管培養液呈肉眼可見的渾濁,這種情況一般就是細菌污染,具體判斷還需要結合鏡下的特征。

第二步就是去導致顯微鏡下結合鏡下特征判斷:

 

細菌污染

 

特征:培液會變黃,而且是渾濁的黃色,鏡下觀察不到正常細胞形態,鏡下遍布細沙樣的黑點。細菌污染一定要及時查找原因,如果換液的細胞全部污染,就要懷疑是不是培養液污染,或者使用的器械污染。

 

如果傳代的細胞全部污染,也要懷疑培養液的問題,但是不要忽略了胰酶的問題。如果個別皿污染,有可能是一不小心蹭到或者槍頭碰到非無菌區域。

 

懷疑是胰酶或者是培養液的問題,可以空培養,取空皿只加入懷疑的胰酶或者培養液培養,第二天觀察。

 

 

霉菌污染

 

特征:培液不變渾濁但是會變黃,一般肉眼可見培養液中有團塊的霉菌菌落,鏡下呈細絲竹節管狀,有菌絲結構。霉菌梅雨季節多見,一般霉菌污染及時扔掉,徹底清潔培養箱

 

白色念珠菌污染

 

特征:培液顏色沒有明顯改變,污染嚴重會變黃,但是是澄清的黃不變渾濁,鏡下觀察到好多像球形的亮點,多的話會聚集成葡萄串樣。白色念珠菌污染不要搶救立馬扔了,救也救不好,而且白色念珠菌會互相通過孢子傳染。

 

 

桿菌污染

 

特征:鏡下看到許多桿狀的細菌,培液顏色沒有明顯改變。

 

 

支原體污染

 

特征:支原體污染很隱蔽,主要表現為細胞在生長速度變慢,細胞狀態形態改變,而且不斷死亡,鏡下沒啥改變,有時可見許多黑色的細胞碎片。檢測支原體污染可以使用支原體檢測試劑盒進行檢測,現在市面上抗支原體的藥很多,效果也都可以。不確定是不是支原體污染可以使用支原體藥試一下,如果細胞狀態明顯改善,有可能就是支原體污染。

 

 

黑膠蟲污染

 

特征:很邪乎,各種說法都有,一般認為是鏡下許多黑點在不斷布朗運動,剛開始對細胞沒啥明顯影響,多時會影響細胞的生長。一般也治不好,就扔了吧。現在主流認為黑膠蟲是血清的問題,可以從新換一批次血清試一下。

 

其實污染也沒有想象中的那么可怕,在做好消毒滅菌工作的基礎上,提高自己的無菌意識和操作技術才是最為重要的。

 

從進入細胞培養室的穿著到超凈臺里物品的擺放都大有學問,對于剛養細胞的新手跟著師兄師姐養細胞是個很好的方式,剛開始不要著急上手,看師兄師姐操作時重點看他們的物品擺放、培養皿培養板開蓋的方式和放置、吹打細胞的手法等小細節。

關鍵詞:古朵生物  細胞  染色液    

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